ألماسي | Bacteria Staphylococcus Aureus

التشخيص الكلاسيكي :- اعتمادًا على نوع العدوى الموجودة ، يتم الحصول على عينة مناسبة وفقًا لذلك وإرسالها إلى المختبر لتحديدها نهائيًا باستخدام الاختبارات البيوكيميائية أو الإنزيمية. يتم إجراء صبغة جرام أولاً لتوجيه الطريق ، والتي يجب أن تظهر البكتيريا النموذجية الموجبة للجرام ، في مجموعات. ثانيًا ، تُزرع العزلة على أجار ملح مانيتول ، وهو وسط انتقائي يحتوي على 7.5٪ كلوريد الصوديوم الذي يسمح ببكتيريا S. aureus بالنمو ، مما ينتج مستعمرات صفراء اللون نتيجة تخمر المانيتول والانخفاض اللاحق في درجة الحموضة في الوسط. علاوة على ذلك ، من أجل التمايز على مستوى الأنواع ، الكاتلاز (موجب لجميع أنواع المكورات العنقودية) ، تجلط الدم (تكوين جلطة الفيبرين ، إيجابي لـ S. aureus ، DNAse (منطقة التصفية على أجار DNase) ، الليباز (لون أصفر ورائحة زنخة ) ، واختبارات الفوسفاتيز (اللون الوردي). بالنسبة للتسمم الغذائي بالمكورات العنقودية ، يمكن إجراء نوع الملتهمة لتحديد ما إذا كانت المكورات العنقودية التي تعافت من الطعام هي مصدر العدوى. التشخيص السريع والكتابة :- سيتم الاستفسار عن الأنشطة والطعام الأخير الذي تناوله المريض مؤخرًا من قبل الطبيب ، ويتم إجراء الفحص البدني لمراجعة أي أعراض. مع وجود أعراض أكثر شدة ، قد تكون اختبارات الدم و زراعة البراز مناسبة. تعتبر مختبرات علم الأحياء الدقيقة التشخيصية والمختبرات المرجعية أساسية لتحديد حالات تفشي سلالات العنقودية الذهبية. أتاحت التطورات الجينية الحديثة تقنيات موثوقة وسريعة لتحديد وتوصيف العزلات السريرية للمكورات العنقودية الذهبية في الوقت الفعلي. تدعم هذه الأدوات استراتيجيات مكافحة العدوى للحد من انتشار البكتيريا وضمان الاستخدام المناسب للمضادات الحيوية. يتزايد استخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل الكمي لتحديد حالات تفشي العدوى. عند مراقبة تطور العنقودية الذهبية وقدرتها على التكيف مع كل مضاد حيوي معدل ، يتم استخدام طريقتين أساسيتين تعرفان باسم "القائمة على النطاق" أو "القائمة على التسلسل". مع وضع هاتين الطريقتين في الاعتبار ، غالبًا ما يتم إجراء طرق أخرى مثل الكتابة التسلسلية متعددة التركيز ( multilocus sequence typing - اختصارها MLST) ، والرحلان الكهربائي للهلام النبضي (pulsed-field gel electrophoresis -اختصارهاPFGE) ، وكتابة العاثيات ، وكتابة مكان السبا ، وكتابة SCCmec أكثر من غيرها. باستخدام هذه الطرق ، يمكن تحديد المكان الذي نشأت فيه سلالات MRSA وأيضًا مكان وجودها حاليًا. باستخدام MLST ، تستخدم تقنية الكتابة هذه أجزاء من عدة جينات التدبير المنزلي المعروفة باسم aroE و glpF و gmk و pta و tip و yqiL. يتم بعد ذلك تخصيص رقم لهذه التسلسلات والذي يعطي لسلسلة من عدة أرقام تعمل كملف تعريف أليلي. على الرغم من أن هذه طريقة شائعة ، إلا أن أحد القيود المفروضة على هذه الطريقة هو الحفاظ على المصفوفة الدقيقة التي تكتشف ملفات تعريف الأليلات الجديدة ، مما يجعلها تجربة مكلفة وتستغرق وقتًا طويلاً. مع PFGE ، وهي طريقة لا تزال مستخدمة بكثرة ويعود تاريخها إلى أول نجاح لها في الثمانينيات ، لا تزال قادرة على المساعدة في التمييز بين عزلات MRSA ، ولتحقيق ذلك ، تستخدم هذه التقنية رحلانًا كهربيًا متعددًا ، جنبًا إلى جنب مع تدرج جهد لعرض دقة واضحة للجزيئات . ثم تنتقل شظايا المكورات العنقودية الذهبية إلى أسفل الهلام ، مما ينتج عنه أنماط عصابات محددة يتم مقارنتها لاحقًا مع العزلات الأخرى على أمل تحديد السلالات ذات الصلة. تشمل قيود الطريقة الصعوبات العملية المتعلقة بأنماط النطاق المنتظمة وحساسية PFGE ككل. تعتبر كتابة موقع السبا أيضًا أسلوبًا شائعًا يستخدم منطقة موضعية واحدة في منطقة متعددة الأشكال من S. aureus لتمييز أي شكل من أشكال الطفرات. على الرغم من أن هذه التقنية غالبًا ما تكون غير مكلفة وتستغرق وقتًا أقل ، فإن فرصة فقدان القوة التمييزية التي تجعل من الصعب التمييز بين مجمعات MLST clonal تمثل قيودًا حاسمة. علاج :- بالنسبة للسلالات الحساسة ، يكون العلاج المفضل لعدوى بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية هو البنسلين. مضاد حيوي مشتق من بعض أنواع البنسليوم الفطرية ، البنسلين يمنع تكوين الروابط المتقاطعة الببتيدوغليكان التي توفر الصلابة والقوة في جدار الخلية البكتيرية. ترتبط حلقة البنسلين المكونة من أربعة أعضاء β-lactam بإنزيم DD-transpeptidase ، وهو إنزيم يعمل ، عند عمله ، على ربط سلاسل من الببتيدوغليكان التي تشكل جدران الخلايا البكتيرية. يثبط ارتباط β-lactam بـ DD-transpeptidase وظائف الإنزيم ولم يعد بإمكانه تحفيز تكوين الروابط المتقاطعة. نتيجة لذلك ، يكون تكوين جدار الخلية وتدهوره غير متوازن ، مما يؤدي إلى موت الخلية. ومع ذلك ، في معظم البلدان ، تكون مقاومة البنسلين شائعة للغاية (> 90٪) ، ويكون علاج الخط الأول هو الأكثر شيوعًا مضاد حيوي بيتا لاكتام المقاوم للبنسليناز (على سبيل المثال ، أوكساسيللين أو فلوكلوكساسيللين ، وكلاهما لهما نفس آلية العمل كبنسلين) أو فانكومايسين ، اعتمادًا على أنماط المقاومة المحلية. يمكن استخدام العلاج المركب مع الجنتاميسين لعلاج الالتهابات الخطيرة ، مثل التهاب الشغاف ، ولكن استخدامه مثير للجدل بسبب ارتفاع مخاطر تلف الكلى. تعتمد مدة العلاج على موقع الإصابة وشدتها. تم استخدام ريفامبيسين المساعد تاريخياً في إدارة بكتريا الدم المكورات العنقودية الذهبية ، ولكن أظهرت التجارب المعشاة ذات الشواهد أن هذا ليس له فائدة عامة على العلاج بالمضادات الحيوية القياسية. كانت مقاومة المضادات الحيوية في بكتيريا S. aureus غير شائعة عند تقديم البنسلين لأول مرة في عام 1943. وبالفعل ، فإن طبق بيتري الأصلي الذي لاحظ فيه ألكسندر فليمنج من جامعة إمبريال كوليدج لندن النشاط المضاد للبكتيريا لفطر البنسليوم كان ينمي ثقافة العقدية الذهبية. بحلول عام 1950 ، 40٪ من عزلات المكورات العنقودية الذهبية كانت مقاومة للبنسلين. بحلول عام 1960 ، ارتفعت هذه النسبة إلى 80٪. المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين (MRSA ، غالبًا ما تُنطق / mɜːrsə / أو / m ɑːr ɛs eɪ /) ، هي واحدة من عدد من سلالات المكورات العنقودية الذهبية المخيفة بشدة والتي أصبحت مقاومة لمعظم المضادات الحيوية β-lactam. لهذا السبب ، يشيع استخدام فانكومايسين ، وهو مضاد حيوي ببتيد جليكوبتيد ، لمكافحة جرثومة MRSA. يثبط الفانكومايسين تخليق الببتيدوغليكان ، ولكن على عكس المضادات الحيوية بيتا لاكتام ، تستهدف المضادات الحيوية ببتيد الجليكوبتيد الأحماض الأمينية في جدار الخلية وترتبط بها ، مما يمنع تكوين روابط الببتيدوغليكان. غالبًا ما توجد سلالات MRSA مرتبطة بمؤسسات مثل المستشفيات ، ولكنها أصبحت منتشرة بشكل متزايد في العدوى المكتسبة من المجتمع. يمكن علاج الالتهابات الجلدية البسيطة باستخدام مرهم مضاد حيوي ثلاثي. أحد العوامل الموضعية الموصوفة هو Mupirocin ، وهو مثبط تخليق البروتين الذي يتم إنتاجه بشكل طبيعي بواسطة بكتيريا Pseudomonas fluorescens وقد حقق نجاحًا في علاج S. aureus الأنفي.

مقاومة المضادات الحيوية :- تم العثور على المكورات العنقودية الذهبية لتكون ثاني مسببات الأمراض للوفيات المرتبطة بمقاومة مضادات الميكروبات في عام 2019.يتم التوسط في مقاومة المكورات العنقودية للبنسلين عن طريق إنتاج البنسليناز (شكل من أشكال بيتا لاكتاماز): إنزيم يشق الحلقة β-lactam من جزيء البنسلين ، مما يجعل المضاد الحيوي غير فعال. المضادات الحيوية المقاومة للبنسليناز β-lactam ، مثل ميثيسيلين،نافسيلين،أوكساسيلين،كلوكساسيللين،ديكلوكس اسيللين ،وفلوكلوكساسيللين قادرة على مقاومة التحلل بواسطة البنسليناز المكورات العنقودية. يتم التوسط في مقاومة الميثيسيلين عبر أوبرون ميك ، وهو جزء من كروموسوم كاسيت المكورات العنقودية (SCCmec). SCCmec هي عائلة من العناصر الوراثية المتنقلة ، وهي قوة دافعة رئيسية لتطور S. aureus. يتم منح المقاومة من قبل جين mecA ، الذي يرمز لبروتين متغير مرتبط بالبنسلين (PBP2a أو PBP2 ') الذي له ألفة أقل للربط β-lactams (البنسلين ، السيفالوسبورينات ، والكاربابينيمات). هذا يسمح بمقاومة جميع المضادات الحيوية β-lactam ، ويمنع استخدامها السريري أثناء عدوى MRSA. أوضحت الدراسات أن هذا العنصر الجيني المتحرك قد تم الحصول عليه بواسطة سلالات مختلفة في أحداث منفصلة لنقل الجينات ، مما يشير إلى عدم وجود سلف مشترك لسلالات مختلفة من MRSA. ومن المثير للاهتمام ، أن إحدى الدراسات تشير إلى أن MRSA تضحي بالضراوة ، على سبيل المثال ، إنتاج السموم والغزو ، من أجل البقاء وإنشاء الأغشية الحيوية.كانت المضادات الحيوية للأمينوغليكوزيد ، مثل كانامايسين ، وجنتاميسين ، وستربتومايسين ، فعالة في يوم من الأيام ضد عدوى المكورات العنقودية حتى طورت السلالات آليات لتثبيط عمل الأمينوغليكوزيدات ، والذي يحدث عن طريق تفاعلات الأمين و / أو الهيدروكسيل مع الحمض النووي الريبي الريبوسومي للريبوسوم الفرعي 30S. الآليات الرئيسية لآليات مقاومة الأمينوغليكوزيد مقبولة حاليًا وعلى نطاق واسع: الإنزيمات المعدلة للأمينوغليكوزيد ، والطفرات الريبوزومية ، والتدفق النشط للدواء خارج البكتيريا. تعمل الإنزيمات المعدلة للأمينوغليكوزيد على تعطيل الأمينوغليكوزيد عن طريق الربط التساهمي إما بشق فوسفات أو نيوكليوتيد أو أسيتيل إما بالمجموعة الوظيفية الرئيسية للأمين أو الكحول (أو كلا المجموعتين) للمضاد الحيوي. هذا يغير الشحنة أو يعيق المضاد الحيوي بشكل معقد ، مما يقلل من ألفة ارتباط الريبوسوم. في المكورات العنقودية الذهبية ، فإن أفضل إنزيم معدل للأمينوغليكوزيد تميزًا هو أمينوغليكوزيد أدينيل ترانسفيراز 4 'IA (ANT (4') IA). تم حل هذا الإنزيم عن طريق علم البلورات بالأشعة السينية. هذا الإنزيم قادر على ربط جزء أدينيل بمجموعة هيدروكسيل 4 بوصات للعديد من الأمينوغليكوزيدات ، بما في ذلك الكاماميسين والجنتاميسين. يتم التوسط في مقاومة Glycopeptide عن طريق اكتساب جين vanA ، الذي ينشأ من Tn1546 transposon الموجود في البلازميد في المكورات المعوية ورموز إنزيم ينتج ببتيدوغليكان بديل لا يرتبط به فانكومايسين. اليوم ، أصبحت المكورات العنقودية الذهبية مقاومة للعديد من المضادات الحيوية الشائعة الاستخدام. في المملكة المتحدة ، 2٪ فقط من جميع عزلات المكورات العنقودية الذهبية حساسة للبنسلين ، مع صورة مماثلة في بقية العالم. تم تطوير البنسلينات المقاومة للبيتا لاكتاماز (ميثيسيلين ، أوكساسيللين ، كلوكساسيللين ، وفلوكلوكساسيللين) لعلاج بكتريا المكورة العنقودية البرتقالية المقاومة للبنسلين ، ولا تزال تستخدم كخط علاج أول. كان الميثيسيلين هو أول مضاد حيوي يتم استخدامه في هذه الفئة (تم تقديمه في عام 1959) ، ولكن بعد عامين فقط ، تم الإبلاغ عن الحالة الأولى للمكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين (MRSA) في إنجلترا. على الرغم من هذا ، ظلت MRSA عمومًا اكتشافًا غير شائع ، حتى في المستشفيات ، حتى التسعينيات ، عندما انتشر انتشار MRSA في المستشفيات ، وهي الآن مستوطنة. الآن ، المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين (MRSA) ليست فقط أحد مسببات الأمراض البشرية التي تسبب مجموعة متنوعة من العدوى ، مثل عدوى الجلد والأنسجة الرخوة (SSTI) والالتهاب الرئوي والإنتان ، ولكنها يمكن أن تسبب أيضًا مرضًا للحيوانات ، المعروف باسم الماشية - جرثومة MRSA (LA-MRSA). عادة ما يتم علاج عدوى بكتيريا MRSA في كل من المستشفى والمجتمع بالمضادات الحيوية التي لا تحتوي على بيتا لاكتام ، مثل الكليندامايسين (لينكوزامين) وكوتريموكسازول (المعروف أيضًا باسم تريميثوبريم / سلفاميثوكسازول). أدت مقاومة هذه المضادات الحيوية أيضًا إلى استخدام مضادات حيوية جديدة واسعة الطيف من مضادات الجرام إيجابية الجرام ، مثل لينزوليد ، نظرًا لتوافرها كدواء يؤخذ عن طريق الفم. علاج الخط الأول للعدوى الغازية الخطيرة الناتجة عن جرثومة MRSA هو حاليًا المضادات الحيوية غليكوببتيد (فانكومايسين وتيكوبلانين). تحدث عدد من المشاكل مع هذه المضادات الحيوية ، مثل الحاجة إلى الإعطاء عن طريق الوريد (لا يتوفر تحضير عن طريق الفم) ، والسمية ، والحاجة إلى مراقبة مستويات الدواء بانتظام عن طريق اختبارات الدم. أيضًا ، لا تخترق المضادات الحيوية ببتيد الجليكوبتيد الأنسجة المصابة جيدًا (وهذا مصدر قلق خاص مع التهابات الدماغ والسحايا والتهاب الشغاف). لا ينبغي استخدام Glycopeptides لعلاج الميثيسيلين المكورات العنقودية الذهبية (MSSA) ، لأن النتائج أقل شأنا. نظرًا للمستوى العالي من المقاومة للبنسلينات وبسبب احتمالية تطوير MRSA لمقاومة الفانكومايسين ، فقد نشرت المراكز الأمريكية لمكافحة الأمراض والوقاية منها إرشادات للاستخدام المناسب للفانكومايسين. في الحالات التي يُعرف فيها أن معدل الإصابة بعدوى بكتيريا MRSA مرتفع ، قد يختار الطبيب المعالج استخدام مضاد حيوي ببتيد جليكوبتيد حتى يتم معرفة هوية الكائن الحي المصاب. بعد التأكد من أن العدوى ناجمة عن سلالة حساسة للميثيسيلين من S. aureus ، يمكن تغيير العلاج إلى فلوكلوكساسيللين أو حتى البنسلين ، حسب الاقتضاء. المكورات العنقودية الذهبية المقاومة للفانكومايسين (VRSA) هي سلالة من المكورات العنقودية الذهبية التي أصبحت مقاومة للببتيدات السكرية. تم الإبلاغ عن أول حالة لفانكومايسين وسيط العنقودية الذهبية (VISA) في اليابان في عام 1996 ؛ ولكن تم الإبلاغ عن الحالة الأولى للمكورات العنقودية الذهبية المقاومة حقًا للمضادات الحيوية ببتيد الجليكوبتيد فقط في عام 2002. وقد تم الإبلاغ عن ثلاث حالات من عدوى بكتيريا VRSA في الولايات المتحدة اعتبارًا من عام 2005. ويمكن تفسير مقاومة مضادات الميكروبات في S. aureus جزئيًا على الأقل من خلال قدرتها على التكيف. تساعد مسارات متعددة لتوصيل الإشارات المكونة من بكتيريا S. aureus على التعبير عن الجينات المطلوبة للبقاء تحت ضغط مضادات الميكروبات. النقل :- حوالي 33٪ من سكان الولايات المتحدة يحملون بكتيريا S. aureus وحوالي 2٪ يحملون MRSA. حتى مقدمي الرعاية الصحية يمكن أن يكونوا مستعمرين للجرثومة MRSA. يعتبر نقل المكورات العنقودية الذهبية مصدرًا مهمًا للعدوى المكتسبة من المستشفيات (وتسمى أيضًا nosocomial) والمكورات العنقودية الذهبية المقاومة للميثيسيلين المكتسبة من المجتمع. على الرغم من أن بكتريا S. aureus يمكن أن تكون موجودة على جلد العائل ، فإن نسبة كبيرة من نقلها تمر عبر الفتحات الأمامية للممرات الأنفية ويمكن أن تكون موجودة أيضًا في الأذنين. تنتج قدرة الممرات الأنفية على إيواء العقدية الذهبية عن مزيج من ضعف أو خلل في مناعة المضيف وقدرة البكتيريا على التهرب من المناعة الفطرية للمضيف. يتورط حمل الأنف أيضًا في حدوث عدوى المكورات العنقودية. السيطرة على العدوى :- يتم انتشار بكتيريا S. aureus (بما في ذلك MRSA) بشكل عام من خلال الاتصال بين البشر ، على الرغم من أن بعض الأطباء البيطريين قد اكتشفوا مؤخرًا أن العدوى يمكن أن تنتشر عن طريق الحيوانات الأليفة ، حيث يُعتقد أن التلوث البيئي يلعب دورًا أقل أهمية نسبيًا. لذلك ، فإن التركيز على تقنيات غسل اليدين الأساسية فعال في منع انتقاله. يقلل استخدام المرايل والقفازات من قبل الموظفين من ملامسة الجلد للجلد ، وبالتالي يقلل من خطر انتقال العدوى. في الآونة الأخيرة ، تم الإبلاغ عن عدد لا يحصى من حالات بكتريا المكورة العنقودية الذهبية في المستشفيات في جميع أنحاء أمريكا. يتم تسهيل انتقال العامل الممرض في الأماكن الطبية حيث تكون نظافة العاملين في مجال الرعاية الصحية غير كافية. المكورات العنقودية الذهبية هي بكتيريا شديدة الصلابة ، كما هو موضح في دراسة حيث تعيش على البوليستر لمدة تقل عن ثلاثة أشهر. البوليستر هو المادة الرئيسية المستخدمة في ستائر الخصوصية بالمستشفى. يتم نقل البكتيريا على أيدي العاملين في مجال الرعاية الصحية ، الذين قد يلتقطونها من مريض يبدو أنه يتمتع بصحة جيدة يحمل سلالة حميدة أو متعايشة من بكتيريا S. aureus ، ثم ينقلها إلى المريض التالي الذي يتم علاجه. يمكن أن يؤدي إدخال البكتيريا في مجرى الدم إلى مضاعفات مختلفة ، بما في ذلك التهاب الشغاف والتهاب السحايا ، وتعفن الدم إذا كان منتشرًا. أثبت الإيثانول أنه مطهر موضعي فعال ضد MRSA. يمكن استخدام الأمونيوم الرباعي جنبًا إلى جنب مع الإيثانول لزيادة مدة إجراء التعقيم. تتضمن الوقاية من عدوى المستشفيات التنظيف الروتيني والنهائي. بخار الكحول غير القابل للاشتعال في ثاني أكسيد الكربون 2 تتمتع أنظمة NAV-CO2 بميزة ، لأنها لا تهاجم المعادن أو البلاستيك المستخدم في البيئات الطبية ، ولا تساهم في مقاومة مضادات البكتيريا. من الوسائل المهمة وغير المعترف بها سابقًا لاستعمار MRSA وانتقالها المرتبط بالمجتمع.تُقتل المكورات العنقودية الذهبية في دقيقة واحدة عند 78 درجة مئوية وفي غضون عشر دقائق عند 64 درجة مئوية ولكنها مقاومة للتجمد. تم وصف سلالات معينة من بكتيريا S. aureus بأنها مقاومة لتطهير الكلور يمكن أن يقلل استخدام مرهم mupirocin من معدل العدوى بسبب نقل الأنف من S. aureus. هناك أدلة محدودة على أن تطهير الأنف من بكتريا المكورة العنقودية الذهبية باستخدام المضادات الحيوية أو المطهرات يمكن أن يقلل من معدلات التهابات موقع الجراحة. الأمراض الرئيسية التي تسببها المكورات العنقودية الذهبية :- 1.التهابات الجلد والتهابات الجروح الجراحية Skin Infections & Surgical wound infections 2.التهاب العظم والنقي Osteomyelitis 3.تسمم الطعام / التهاب المعدة والأمعاء Food poisoning/gastroenteritis 4.متلازمة الصدمة التسممية Toxic shock syndrome 5.الالتهاب الرئوي (المكتسب من المستشفى بشكل رئيسي)Pneumonia (mainly hospital acquired) 6.التهاب الشغاف الحادAcute endocarditis 7.التهاب المفاصل المعدي Infective arthritis 8.التهاب اللفافة الناخرNecrotizing fasciitis 9.تعفن الدم ومتلازمة الجلد المسموط العنقودية (Sepsis and Staphylococcal scalded skin syndrome اختصارها SSSS) الخصائص الهامة للمكورات العنقودية الذهبية :- 1.مكورات موجبة الجرام تحدث منفردة وأزواج ، رباعي ، سلاسل قصيرة ، وعناقيد غير منتظمة تشبه العنب. 2.اختبار الكاتلاز: إيجابي. 3.اختبار تجلط الدم: إيجابي. 4.خصائص أخرى: اللاهوائية الاختيارية ، غير متحركة ، غير جراحية ، غالبًا غير مغلفة أو لها كبسولة محدودة. عوامل الخطورة:- 1.بروتينات السطح:- -البروتين أ (يمنع تنشيط المتمم) -عامل التكتل -حمض التيشويك (التقيد وتحريض الصدمة الإنتانية) 2 مستضدات فائقة:- -السم المعوي Enterotoxin A-D -Exfoliatin A & B -Toxic Shock Toxin -TSST -superantigen 3 السموم الخلوية:- -α-hemolysin الفا -β-hemolysin بيتا -γ-hemolysin دلتا -δ-hemolysinكاما -Panton-Valentine Leukocidin-PVL -Exfliatin(انحلال البشرة ينشق ديسموجلين في ديسموسومات - epidermolytic cleaves desmoglein in desmosomes) 4.إنزيمات:- -نوكلياز (Nuclease) -ليباز (lipase) -هيالورونيداز (hyaluronidase)، -تجلط الدم- coagulase (يسبب تجلط البلازما) -ستافيلوكيناز (staphylokinase) -جلسرين إستر هيدرولاز(glycerol ester hydrolase) -كاتلاز- catalase (تدهور H2O2 يحد من قدرة العدلات على قتل S. aurues) عينة المكورات العنقودية الذهبية :- 1.صديد - آفات قيحية. 2.البلغم - عدوى الجهاز التنفسي. 3.الدم - تسمم . 4.بول - التهاب الجهاز البولي. 5.براز - تسمم غذائي.

التشخيص المختبري :- 1.Nutrient Agar :- الآجار المغذي هو غرض عام ، وسيط مغذي يستخدم لزراعة الميكروبات التي تدعم نمو مجموعة واسعة من الكائنات غير الحساسة. يشتهر أجار المغذيات لأنه يمكن أن ينمو مجموعة متنوعة من البكتيريا والفطريات ، ويحتوي على العديد من العناصر الغذائية اللازمة لنمو البكتيريا. تكوين أجار المغذيات :- - 0.5٪ ببتون إنه هضم إنزيمي للبروتين الحيواني. الببتون هو المصدر الرئيسي للنيتروجين العضوي للبكتيريا النامية. - 0.3٪ مستخلص لحم البقر / مستخلص الخميرة هي المواد القابلة للذوبان في الماء التي تساعد في نمو البكتيريا ، مثل الفيتامينات والكربوهيدرات ومركبات النيتروجين العضوية والأملاح. - 1.5٪ أجار إنه عامل التصلب. - 0.5٪ كلوريد الصوديوم يحافظ وجود كلوريد الصوديوم في أجار المغذيات على تركيز الملح في الوسط الذي يشبه السيتوبلازم في الكائنات الحية الدقيقة. - ماء مقطرة الماء ضروري لنمو وتكاثر الكائنات الحية الدقيقة ، كما أنه يوفر الوسيلة التي يمكن من خلالها نقل العناصر الغذائية المختلفة. - يتم ضبط Ph الأس الهيدروجيني إلى متعادل (7.4) عند 25 درجة مئوية. تحضير أجار المغذيات :- 1.علق 28 جم من مسحوق أجار المغذي في 1 لتر من الماء المقطر. 2.سخني هذا الخليط مع التحريك لإذابة جميع المكونات بالكامل. 3.الأوتوكلاف المخلوط المذاب عند 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. 4.بمجرد تعقيم أجار المغذيات ، اتركه ليبرد ولكن لا يتصلب. 5.نصب أجار المغذيات في كل لوحة وترك الصفائح على السطح المعقم حتى يصلب أجار. 6.أعد وضع غطاء كل طبق بتري وقم بتخزين الأطباق في الثلاجة. استخدامات أجار المغذيات:- 1. كثيرا ما يستخدم لعزل وتنقية الزراعة. 2. يمكن استخدامه أيضًا كوسيلة لإنتاج المروج البكتيرية اللازمة لاختبارات الحساسية للمضادات الحيوية. في الواقع ، عادةً ما يتم إجراء اختبار حساسية المضادات الحيوية على وسائط مصممة خصيصًا لهذا الغرض. فيديو عمل Nutrient Agar :- https://youtu.be/YX_b02KYN9g 2.تلطيخ الجرام(Gram staining):- يعد تلطيخ الجرام أحد أساليب التلوين التفاضلي الشائعة والأكثر استخدامًا في علم الأحياء الدقيقة ، والذي قدمه عالم البكتيريا الدنماركي هانز كريستيان جرام في عام 1884. هذا الاختبار يميز البكتيريا إلى بكتيريا موجبة الجرام وبكتيريا سلبية الجرام ، مما يساعد في تصنيف وتمايز البكتريا. الكائنات الدقيقة. مبدأ تلوين غرام:- عندما تكون البكتيريا ملطخة بالبقعة الأولية Crystal Violet ويتم إصلاحها بواسطة الرائحة ، فإن بعض البكتيريا قادرة على الاحتفاظ بالبقعة الأولية وبعضها يتم إزالة اللون بواسطة الكحول. تحتوي جدران خلايا البكتيريا الموجبة للجرام على طبقة سميكة من مجمعات البروتين والسكر تسمى ببتيدوغليكان ومحتوى الدهون منخفض. يؤدي إزالة لون الخلية إلى تجفيف جدار الخلية السميك وتقليصه ، مما يؤدي إلى إغلاق المسام في جدار الخلية ومنع البقعة من الخروج من الخلية. لذلك لا يمكن للإيثانول إزالة مركب Crystal Violet-Iodine المرتبط بالطبقة السميكة من الببتيدوغليكان للبكتيريا الموجبة للجرام ويظهر باللون الأزرق أو الأرجواني. في حالة البكتيريا سالبة الجرام ، يأخذ جدار الخلية أيضًا مركب CV-Iodine ولكن نظرًا للطبقة الرقيقة من الببتيدوغليكان والطبقة الخارجية السميكة التي تتكون من الدهون ، يتم غسل مركب CV-Iodine. عندما يتعرضون للكحول ، يقوم مزيل اللون بإذابة الدهون في جدران الخلايا ، مما يسمح لمركب اليود البنفسجي البلوري بالتسرب من الخلايا. ثم بعد تلطيخها مرة أخرى بالسفرانين ، تأخذ البقعة وتظهر باللون الأحمر. الكواشف المستخدمة في تلطيخ الجرام :- 1.Crystal Violet, the primary stain 2.Iodine, the mordant 3.(A decolorizer made of acetone and alcohol (95% 4.Safranin, the counterstain إجراء تلوين غرام :- 1.خذ شريحة نظيفة وخالية من الشحوم. 2.تحضير مسحة التعليق على الشريحة النظيفة بحلقة من العينة(يقصد فيها بكتيريا). 3.يكون الهواء الجاف والحرارة. 3.تم سكب Crystal Violet وحفظه لمدة 30 ثانية إلى دقيقة واحدة وشطفه بالماء. 4.اغمر يود(Iodine) الجرام لمدة دقيقة واغسله بالماء. 5.بعد ذلك ،اغسليها باستخدام 95٪ كحول أو أسيتون لمدة 10-20 ثانية ثم اشطفيها بالماء. 6.يضف safranin لمدة دقيقة واحدة واغسله بالماء. 7.يجفف في الهواء و نشوفه تحت المجهر. تفسير :- غرام إيجابي: اللون الأزرق / الأرجواني. سلبية الغرام: اللون الأحمر. طريقة عمل Gram Staining :- https://youtu.be/sxa46xKfIOY :-Examples Gram Positive Bacteria:- Actinomyces, Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Enterococcus, Gardnerella, Lactobacillus, Listeria, Mycoplasma, Nocardia, Staphylococcus, Streptococcus, Streptomyces ,etc. Gram Negative Bacteria:- Escherichia coli (E. coli), Salmonella, Shigella, and other Enterobacteriaceae, Pseudomonas,Moraxella, Helicobacter, Stenotrophomonas, Bdellovibrio, acetic acid bacteria, Legionella etc 3.blood agar اجار دم :- أجار الدم (BA) عبارة عن وسط مخصب يستخدم لزراعة البكتيريا أو الميكروبات التي لا تنمو بسهولة. تسمى هذه البكتيريا "حساسة" لأنها تتطلب بيئة غذائية خاصة ومخصبة مقارنة بالبكتيريا الروتينية. يستخدم آجار الدم في زراعة مجموعة واسعة من مسببات الأمراض خاصة تلك التي يصعب نموها مثل Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae and Neisseria species. كما أنه مطلوب للكشف عن البكتيريا الحالة للدم والتمييز بينها ، وخاصة أنواع Streptococcus. وهو أيضًا وسيط تفاضلي يسمح باكتشاف انحلال الدم (تدمير كرات الدم الحمراء) عن طريق السموم الحالة للخلايا التي تفرزها بعض البكتيريا ، مثل سلالات معينة من Streptococcus, Enterococcus, Staphylococcus, and Aerococcus. يمكن جعل أجار الدم انتقائيًا لبعض مسببات الأمراض عن طريق إضافة المضادات الحيوية أو المواد الكيميائية أو الأصباغ. تشمل الأمثلة أجار الدم البنفسجي الكريستالي لاختيار Streptococcus pyogens من مسحات الحلق ، وأجار الدم kanamycin أو neomycin لاختيار اللاهوائية من القيح(pus). ما هو تكوين آجار الدم :- - 0.5٪ ببتون -0.3٪ مستخلص لحم البقر / مستخلص الخميرة -1.5٪ أجار -0.5٪ كلوريد الصوديوم -ماء مقطرة (بما أن Blood Agar مصنوع من Nutrient Agar ، أعلاه هو تكوين Nutrient Agar) -5٪ دم غنم -ph يجب أن يكون الرقم الهيدروجيني من 7.2 إلى 7.6 (7.4) تحضير آجار الدم 1.نقوم بخد 28جم من مسحوق أجار المغذي في 1 لتر من الماء المقطر. 2.سخن هذا الخليط مع التقليب لإذابة جميع المكونات تمامًا. 3.الأوتوكلاف الخليط المذاب على 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة. 4.بمجرد تعقيم أجار المغذيات ، اتركه ليبرد ولكن لا يتصلب. 5.عندما يبرد الأجار إلى 45-50 درجة مئوية ، أضف 5٪ (حجم / حجم) دم معقم منزوع الليف تم تسخينه إلى درجة حرارة الغرفة واخلطه برفق ولكن جيدًا. 6.تجنب فقاعات الهواء. 7.الاستغناء عن السائل في أطباق معقمة. استخدامات أجار الدم 1.أجار الدم هو وسيلة مخصبة للأغراض العامة تستخدم غالبًا في زراعة الكائنات الحية الدقيقة. 2.لتمييز البكتيريا بناءً على خصائصها الانحلالية (انحلال الدم β ، انحلال الدم α (أو غير الانحلالي)). شكل بكتيريا في اجار دم و بكتيريا S.aureus انحلال الدم β فيديو عمل طريقة blood agar :- https://youtu.be/bsIoTuzAjpw 4.تخمير المانيتول Mannitol fermentation :- يستخدم مانيتول ملح أجار (MSA) كوسيط انتقائي وتفاضلي لعزل وتحديد المكورات العنقودية الذهبية من العينات السريرية وغير السريرية. يشجع على نمو مجموعة من البكتيريا بينما يمنع نمو أنواع أخرى. وهو عبارة عن وسط انتقائي تم إعداده وفقًا لتوصيات تشابمان لعزل المكورات العنقودية المسببة للأمراض. تكوين مانيتول ملح أجار (MSA) :- المكونات و جم / لتر :- المجموع 111.025 جرام 1.خلاصة البنكرياس للكازين 5.0 جم 2.الهضم الهضمي للانسجة الحيوانية 5.0 جم 3.خلاصة اللحم البقري 1.0 جم 4.كلوريد الصوديوم 75.0 جم 5.د- مانيتول 10.0 جم 6.فينول أحمر 0.025 جم 7.أجار 15.0 جرام -ماء مقطر = 1000 مل -الرقم الهيدروجيني النهائي 7.4 ± 0.2 عند 25 درجة مئوية. مبدأ مانيتول ملح أجار :- يحتوي ملح مانيتول أجار على بيبتون وخلاصة لحوم البقر التي تزود النيتروجين والفيتامينات والمعادن والأحماض الأمينية الضرورية للنمو. ينتج عن تركيز 7.5٪ من كلوريد الصوديوم تثبيط جزئي أو كامل للكائنات البكتيرية غير المكورات العنقودية. يوفر كلوريد الصوديوم أيضًا الإلكتروليتات الأساسية للنقل والتوازن التناضحي. المانيتول هو الكربوهيدرات القابلة للتخمر ، التي يؤدي تخميرها إلى إنتاج حمض ، يتم اكتشافه بواسطة مؤشر أحمر الفينول ، ويساعد في التمايز بين أنواع المكورات العنقودية. تنتج المكورات العنقودية الإيجابية المخثرة (على سبيل المثال ، Staphylococcus aureus) مستعمرات صفراء ووسط أصفر محيط بينما تنتج المكورات العنقودية السلبية المخثرة مستعمرات حمراء ولا يتغير لون مؤشر الفينول الأحمر. أجار هو عامل التصلب. تسمح إضافة مستحلب صفار البيض بنسبة 5٪ حجم / حجم باكتشاف نشاط الليباز للمكورات العنقودية جنبًا إلى جنب مع تخمر المانيتول. يزيل الملح مستحلب صفار البيض ويتم الكشف عن إنتاج الليباز كمنطقة صفراء معتمة حول المستعمرات. استخدامات مانيتول ملح أجار :- 1.يتم استخدامه للعزل الانتقائي والتمايز للمكورات العنقودية الذهبية من العينات السريرية. 2.كما أنها تستخدم لتعداد المكورات العنقودية في الأغذية ومنتجات الألبان. 3.تم تضمين هذه الوسيلة أيضًا في الدليل التحليلي البكتريولوجي لاختبار مستحضرات التجميل. 4.كما يستخدم في الفحص البكتريولوجي لمياه حمامات السباحة والمنتجعات الصحية ومياه الشرب باستخدام الترشيح الغشائي. تحضير مانيتول ملح أجار :- 1.قم بتعليق 111.025 جم من وسط MRS في 1000 مل من الماء المقطر. 2.غلي المزيج لإذابة الوسائط تمامًا. 3.الأوتوكلاف عند 121 درجة مئوية لمدة 15-20 دقيقة. (اختياري: أضف 5٪ حجم / حجم مستحلب صفار البيض) 4.يبرد حتى 45-50 درجة مئوية ويصب في أطباق بتري. تفسير النتيجة على مانيتول ملح أجار :- نتائج الكائنات الحية :- 1.Staphylococcus aureus:-مستعمرات صفراء ذات مناطق صفراء. 2.(Staphylococci other than S. aureus (e.g. Staphylococcus epidermidis :-مستعمرات عديمة اللون أو حمراء مع مناطق حمراء. 3.Streptococci:-لا يوجد نمو لتتبع النمو. 4.Micrococci:-كبيرة بيضاء إلى برتقالية. 5.Gram-negative bacteria:-لا يوجد نمو لتتبع النمو. حدود مانيتول ملح أجار :- 1.العديد من أنواع المكورات العنقودية غير الذهبية موجبة للمانيتول وتنتج مستعمرات صفراء محاطة بمناطق صفراء على هذا الوسط (على سبيل المثال S. capitis ، S. xylosus ، S. cohnii ، S. sciuri ، S. simulans ، وأنواع أخرى). لذلك ، من الضروري إجراء المزيد من الاختبارات البيوكيميائية لتحديد بكتريا المكورة العنقودية الذهبية أو الأنواع الأخرى. 2.يتم تثبيط معظم الكائنات الحية بخلاف المكورات العنقودية بسبب تركيز الملح العالي الموجود في مانيتول سولت أجار باستثناء بعض الكائنات البحرية الملحية. 3.قد تظهر سلالات قليلة من المكورات العنقودية الذهبية تخمر متأخر من مانيتول. يجب إعادة تحضين الصفائح السلبية طوال الليل قبل التخلص منها. 4.يجب تأكيد المكورات العنقودية الذهبية الافتراضية باختبار تجلط الدم. فيديو عمل Mannitol Salt Agar :- https://youtu.be/s6Wg8GcwoLk 5.اختبار قرص فيرازوليدون Furazolidone Disk Test :- يتم إجراء اختبار قرص فيورازوليدون (فوروكسون) كإجراء لحساسية القرص باستخدام أقراص فيورازوليدون المتاحة تجارياً. يتم تثبيط المكورات العنقودية بواسطة فيورازوليدون ولكن المكورات الدقيقة والأنواع ذات الصلة مقاومة. هذه هي إحدى الطرق الشائعة الاستخدام للتمييز بين المكورات العنقودية والمكورات الدقيقة. تنمو المكورات الدقيقة عادة حتى حافة قرص فيورازوليدون 6 مم. فوروكسون (فيورازوليدون) هو أحد مضادات الميكروبات النيتروفوران الاصطناعية مع نشاط مضاد للأوالي والبكتيريا. فيرازوليدون يربط الحمض النووي البكتيري مما يؤدي إلى تثبيط تدريجي لأكسيداز أحادي الأمين. ومع ذلك ، يمكن رؤية المكورات العنقودية السلبية المخثرة المقاومة للفيورازوليدون في بعض الأحيان. الكواشف 1 أقراص Furazolidone ، 100 ميكروغرام. 2 صفيحة أجار مولر-هينتون. إجراء 1 قم بإعداد معلق للكائن الحي ليتم اختباره في الماء المقطر المعقم . يجب أن يكون التعليق معادلاً لمعيار التعكر 0.5 McFarland. 2 باستخدام مسحة ، انشر معلق الكائن الحي على نصف صفيحة أجار مولر-هينتون. 3 ضع قرص فيورازوليدون بطريقة معقمة في وسط المنطقة الملقحة ، واضغط برفق على القرص بحيث يلتصق بسطح أجار. 4 احتضان الطبق عند 35 درجة مئوية في حاضنة الهواء المحيط لمدة 18-24 ساعة. النتائج والتفسيرات :- 1 مقاومة فيرازوليدون: منطقة التثبيط 9 مم. E.g. Micrococcus luteus 2 فيورازوليدون حساس: منطقة التثبيط> 15 مم. E.g. Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus فيديو Furazolidone Disk Test :- https://youtu.be/sx1uDYSfINA

6.Catalase test:- اختبار الكاتلاز هو اختبار مهم بشكل خاص يستخدم لتحديد ما إذا كانت المكورات موجبة الجرام هي المكورات العنقودية أو العقديات. الكاتلاز هو إنزيم يحول بيروكسيد الهيدروجين إلى ماء وغاز أكسجين. الاختبار سهل الأداء ؛ يتم خلط البكتيريا ببساطة مع H2O2. إذا ظهرت الفقاعات (بسبب إنتاج غاز الأكسجين) ، تكون البكتيريا موجبة للكتلاز. إذا لم تظهر أي فقاعات ، تكون البكتيريا سالبة الكاتلاز. المكورات العنقوديةStaphylococcus والمكورات الدقيقة النيابةMicrococcus spp. هي موجبة الكاتلاز في حين أن Streptococcus و Enterococcus spp سلبية الكاتلاز. مبدأ اختبار كاتالاز :- يتوسط إنزيم الكاتلاز تكسير بيروكسيد الهيدروجين إلى أكسجين وماء. يتضح وجود الإنزيم في العزلة البكتيرية عندما يتم إدخال لقاح صغير في بيروكسيد الهيدروجين ، ويحدث التطور السريع لفقاعات الأكسجين. يتضح نقص الكاتلاز من خلال نقص أو ضعف إنتاج الفقاعات. يجب ألا يزيد عمر الثقافة عن 24 ساعة. وبالتالي تحمي البكتيريا نفسها من التأثير المميت لبيروكسيد الهيدروجين الذي يتراكم كمنتج نهائي لعملية التمثيل الغذائي للكربوهيدرات الهوائية. الغرض أو استخدامات اختبار كاتالاز:- 1.يمكن التفريق بين المكورات المعوية المتشابهة شكليًا (سلبي الكاتلاز) والمكورات العنقودية (إيجابية الكاتلاز) باستخدام اختبار الكاتلاز. 2.كما أنها مفيدة في التفرقة بين البكتيريا الهوائية واللاهوائية. 3.يستخدم اختبار الكاتلاز الكمي للتعرف على السل المتفطرة. 4.يتم استخدامه للتمييز بين سلالات المطثية ، والتي تكون سلبية الكاتلاز ، من سلالات العصيات ، وهي سلالات موجبة. 5.يمكن استخدام اختبار كاتالاز كوسيلة مساعدة لتحديد البكتيريا المعوية. إجراء اختبار كاتالاز ;- طريقة الأنبوب :- 1.صب 1-2 مل من محلول بيروكسيد الهيدروجين في أنبوب اختبار. 2.باستخدام عصا خشبية معقمة أو قضيب زجاجي ، خذ عدة مستعمرات من 18 إلى 24 ساعة من كائن الاختبار واغمرها في محلول بيروكسيد الهيدروجين. 3.راقب للحصول على فقاعات فورية. فيديو طريقة عمل الانبوب :- https://youtu.be/prrA8dppHsU طريقة الشريحة :- 1.استخدم حلقة أو عصا خشبية معقمة لنقل كمية صغيرة من نمو المستعمرة على سطح شريحة زجاجية نظيفة وجافة. 2.ضع قطرة من 3٪ H2O2 في الشريحة الزجاجية. 3.لاحظ تطور فقاعات الأكسجين. فيديو طريقة عمل الشريحة :- https://youtu.be/JtwXNO1zi3w نتيجة تفسير اختبار كاتالاز وأمثلة إيجابية: تنتج فقاعات غزيرة ، فقاعات نشطة :- اسما بكتيريا مثل :- Staphylococci, Micrococci, Listeria, Corynebacterium diphtheriae, Burkholderia cepacia, Nocardia, the family Enterobacteriaceae (Citrobacter, E. coli, Enterobacter, Klebsiella, Shigella, Yersinia, Proteus, Salmonella, Serratia), Pseudomonas, Mycobacterium tuberculosis, Aspergillus, Cryptococcus, and Rhodococcus equi. سلبي: لا توجد فقاعات أو ينتج عنها عدد قليل جدًا من الفقاعات:- اسماء بكثيريا مثل:- Streptococcus and Enterococcus spp احتياطات اختبار كاتالاز :- 1.لا ينبغي أن تؤخذ كائنات الاختبار من مزرعة أجار الدم. تحتوي خلايا الدم الحمراء على مادة الكاتلاز ووجودها يعطي نتيجة إيجابية زائفة. 2.يجب أن يكون عمر الثقافة من 18 إلى 24 ساعة. 3.يجب أن يكون بيروكسيد الهيدروجين طازجًا لأنه غير مستقر للغاية. 4.لا ينبغي استخدام حلقة الأسلاك الحديدية. 5.تنتج بعض البكتيريا البيروكسيداز الذي يحفز تكسير بيروكسيد الهيدروجين مما يتسبب في أن يكون التفاعل إيجابيًا بشكل ضعيف ؛ (بضع فقاعات تتطور ببطء). لا ينبغي الخلط بين هذا ورد الفعل الإيجابي حقًا. 6.لا تقم بإضافة كائن حي إلى الكاشف ، خاصة إذا تم استخدام حلقات التلقيح المحتوية على الحديد. سوف تتسبب الحلقات المحتوية على الحديد في نتائج اختبار إيجابية خاطئة إذا تعرضت لبيروكسيد الهيدروجين. 7.Coagulase Test :- يستخدم اختبار تجلط الدم في التفريق بين المكورات العنقودية الذهبية (الموجبة) التي تنتج إنزيم تجلط الدم من S. epidermis and S. saprophyticus (سلبي) التي لا تنتج تجلط الدم. المكورات العنقودية السلبية المخثرة (Coagulase Negative Staphylococcus اختصارهاCONS) مبدأ اختبار تجلط الدم :- تجلط الدم هو بروتين شبيه بالإنزيم ويسبب تجلط البلازما عن طريق تحويل الفيبرينوجين إلى الفيبرين. تنتج المكورات العنقودية الذهبية شكلين من أشكال تجلط الدم: مرتبط وحر. إنزيم التخثر المرتبط (عامل التكتل) يرتبط بجدار الخلية البكتيرية ويتفاعل مباشرة مع الفيبرينوجين. ينتج عن هذا تناوب الفيبرينوجين بحيث يترسب على خلية المكورات العنقودية ، مما يتسبب في تكتل الخلايا عند خلط المعلق البكتيري بالبلازما. هذا لا يتطلب عامل تفاعل تجلط الدم. تجلط الدم الحر ينطوي على تنشيط عامل تفاعل تجلط الدم بالبلازما (coagulase reacting factor -CRP) ، وهو جزيء ثرومبين معدل أو مشتق ، من تجلط الدم - مركب CRP. يتفاعل هذا المركب بدوره مع الفيبرينوجين لإنتاج جلطة الفيبرين. إجراء وأنواع اختبار تجلط الدم :- اختبار الشريحة (لاكتشاف إنزيم التخثر المرتبط) :- 1.ضع قطرة من محلول فسيولوجي في نهاية كل شريحة ، أو على شريحتين منفصلتين. 2.باستخدام الحلقة أو السلك المستقيم أو العصا الخشنة ، قم باستحلاب جزء من المستعمرة المعزولة في كل قطرة لعمل معلقتين سميكتين. 3.أضف قطرة من بلازما الإنسان أو الأرانب إلى أحد المعلقات ، واخلط بلطف. 4.ابحث عن تكتل الكائنات الحية في غضون 10 ثوانٍ. 5.لا يتم إضافة بلازما إلى التعليق الثاني للتمييز بين أي مظهر حبيبي للكائن الحي من تكتل تجلط الدم الحقيقي. اختبار الأنبوب (للكشف عن تجلط الدم الحر) :- 1.خفف البلازما 1 في 10 في محلول ملحي فسيولوجي (اخلط 0.2 مل من البلازما مع 1.8 مل من محلول ملحي). 2.خذ 3 أنابيب اختبار صغيرة وقم بوضع ملصق عليها مثل T (اختبار) و P (تحكم إيجابي) و N (تحكم سلبي). الاختبار هو 18-24 ساعة لثقافة المرق ، والتحكم الإيجابي هو 18-24 ساعة ثقافة مرق المكورات العنقودية الذهبية والتحكم السلبي هو مرق معقم. 3.ماصة 0.5 مل من البلازما المخففة في كل أنبوب. 4.أضف 5 قطرات (0.1 مل) من كائنات الاختبار إلى الأنبوب المسمى "T" ، و 5 قطرات من استنبات S. aureus إلى الأنبوب المسمى "P" و 5 قطرات من المرق المعقم إلى الأنبوب المسمى "N". 5.بعد الخلط ، احتضان الأنابيب الثلاثة في 35-37 درجة مئوية. 6.افحص لتجلط الدم بعد 1 ساعة. إذا لم يحدث تخثر ، فقم بفحصه كل 30 دقيقة لمدة تصل إلى 6 ساعات. فيديو طرقين شريحة و انبوب :- https://youtu.be/Mtxs9iagW40 تفسير اختبار تجلط الدم 1 يشير التكتل في قطرتين الشريحتين إلى أن الكائن الحي يتراكم تلقائيًا وغير مناسب لاختبار تجلط الدم في الشريحة. يجب تأكيد جميع اختبارات الشريحة السلبية باستخدام اختبار الأنبوب. 2 أثناء اختبار الشريحة ، قد تكون هناك فرصة للحصول على نتائج إيجابية خاطئة في حالة استخدام السترات للبكتيريا (Enterococcus و Pseudomonas). في هذه الحالة أيضًا ، يجب إجراء اختبار الأنبوب وتأكيده. Examples :- Coagulase Positive Organisms:- Staphylococcus aureus and other animal host bacteria like S. pseudintermedius, S. intermedius, S. schleiferi, S. delphini, S. hyicus, S. lutrae, S. hyicus Coagulase Negative Organisms:- Staphylococcus epidermidis, S. saprophyticus, S. warneri, S. hominis, S. caprae, etc.

بسم الله الرحمن الرحيم السلام عليكم ورحمة الله وبركاته كيفكم يا اعضاء وندر لاند كريم؟؟ عسااكم بألف خخير وصصحة وعااافيه؟؟ موضووع طويل و مفيد عن بكتيريا Staphylococcus Aureus و ادري ممكن شرحها طويل جدا حاول قصرها شوي بس كل معلومات فيها مفيده جدا المهم من بكتيريا حساسة جدا بدها زراعة خاص فيها كمان فينا نسويها علي Nutrient Agar نزراعها يكون شكلها ذهبي بس blood agar في هذا اجار اسوي نحلال دم بيتا عشان هيك نعرفها عن باقي بكتيريا اخرة و Mannitol fermentation اجار يمنع باقي بكثيريا اخرة من نمو اجارين اكثر في اختبارات اخرة لها في مصطلحات تسمعونها الاول مرة او يكمن انتو سمعوتها قي كمان Gram Staining بصبغ كل انواع بكتيريا نشوفها تحت مجهر وبطريقة علمية اسهل كثير هيك شوفو فيديو في حفظ ورعايية الله خير الحافظين